當(dāng)前位置：首頁 > 技術(shù)文章 > ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿用戶指南

ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿用戶指南

更新時(shí)間：2025-05-27 點(diǎn)擊次數(shù)：756

產(chǎn)品概述

ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿專為細(xì)胞培養(yǎng)與高分辨率顯微鏡成像設(shè)計(jì)，產(chǎn)自德國，在科研領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。其直徑 35mm，底部采用特殊的 ibidi 聚合物蓋玻片或可選的玻璃材質(zhì)，結(jié)合高壁設(shè)計(jì)，為細(xì)胞培養(yǎng)與觀察提供了理想條件。

產(chǎn)品特點(diǎn)

光學(xué)性能：聚合物蓋玻片底部或玻璃底部，均具有高光學(xué)質(zhì)量。聚合物蓋玻片底部的折射率（nd 589nm）為 1.52，阿貝數(shù) 56，厚度 180μm（#1.5），在高分辨率顯微鏡下能提供清晰圖像，且自發(fā)熒光低，對細(xì)胞成像干擾極小。玻璃底部（如用于特定應(yīng)用的 1.5h 玻璃蓋玻片，厚度 170μm±5μm）同樣具備出色光學(xué)性能，適用于全內(nèi)反射熒光（TIRF）、單分子及超分辨率顯微鏡等成像技術(shù) 。

理想細(xì)胞生長環(huán)境：經(jīng) ibiTreat 處理的表面為細(xì)胞提供了良好的粘附與生長條件，多數(shù)貼壁細(xì)胞無需額外包被即可在此表面良好生長。對于有特殊需求的細(xì)胞培養(yǎng)，還可進(jìn)行細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）蛋白包被。而未處理的疏水表面，可用于需特定包被的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)；bioinert 表面則阻止細(xì)胞粘附，適合懸浮細(xì)胞、細(xì)胞聚集體、球體及類器官培養(yǎng) 。

減少蒸發(fā)設(shè)計(jì)：培養(yǎng)皿蓋子設(shè)有鎖扣位置，能有效減少液體蒸發(fā)，為在非加濕環(huán)境下的長期細(xì)胞培養(yǎng)與研究提供穩(wěn)定條件。同時(shí)，培養(yǎng)皿采用透氣塑料材質(zhì)，確保細(xì)胞培養(yǎng)過程中二氧化碳和氧氣等氣體的正常交換。

操作便捷與通用性：標(biāo)準(zhǔn) 35mm 直徑規(guī)格，方便操作與適配各類實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。高壁設(shè)計(jì)不僅增加了培養(yǎng)容積（2ml），還便于日常使用時(shí)的拿取與操作。此外，該培養(yǎng)皿與所有染色和固定溶劑兼容，可滿足多種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需求。

應(yīng)用場景

細(xì)胞培養(yǎng)與成像：適用于各類細(xì)胞系的培養(yǎng)，以及原代細(xì)胞培養(yǎng) 。結(jié)合其高分辨率成像能力，可用于免疫熒光染色后細(xì)胞的寬場和共聚焦熒光顯微鏡觀察，也適合活細(xì)胞的長時(shí)間成像研究，實(shí)時(shí)監(jiān)測細(xì)胞生長、增殖、分化等動態(tài)過程。

轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)：為細(xì)胞轉(zhuǎn)染提供穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境，可通過后續(xù)成像或分析技術(shù)，評估轉(zhuǎn)染效率與轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的功能變化。

細(xì)胞定位與計(jì)數(shù)：帶有 500µm 網(wǎng)格（如 µ-Dish 35 mm, high grid - 500）的版本，便于對細(xì)胞或細(xì)胞簇進(jìn)行定位，在計(jì)算轉(zhuǎn)染效率、統(tǒng)計(jì)特定區(qū)域內(nèi)細(xì)胞事件數(shù)量等實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮重要作用。

特殊顯微鏡應(yīng)用：使用特殊 DIC 蓋子，可用于微分干涉相差（DIC）顯微鏡觀察。玻璃底部的培養(yǎng)皿版本，特別適用于 TIRF、單分子應(yīng)用以及超分辨率顯微鏡（如 STED、SIM、(F) PALM、(D) STORM）和熒光相關(guān)光譜（FCS）等顯微鏡技術(shù) 。

使用方法

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

培養(yǎng)皿檢查：收到培養(yǎng)皿后，檢查包裝是否完好，單個(gè)培養(yǎng)皿有無破損、污染跡象。確認(rèn)產(chǎn)品規(guī)格、表面處理類型（如 ibiTreat、uncoated、bioinert 等）是否與實(shí)驗(yàn)需求相符。

試劑與耗材準(zhǔn)備：

細(xì)胞培養(yǎng)基：根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)胞類型，選擇合適的培養(yǎng)基，并添加相應(yīng)的血清、抗生素、生長因子等成分。培養(yǎng)基需提前過濾除菌，確保無菌狀態(tài) 。

細(xì)胞：復(fù)蘇凍存細(xì)胞或從培養(yǎng)瓶中消化獲取對數(shù)生長期細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。通過細(xì)胞計(jì)數(shù)確定合適的接種密度。

其他耗材：準(zhǔn)備無菌移液器吸頭、移液管、離心管、鑷子等耗材，所有耗材需保證無菌。若需對培養(yǎng)皿進(jìn)行額外包被（如使用 ECM 蛋白包被未處理表面的培養(yǎng)皿），準(zhǔn)備相應(yīng)包被試劑。

細(xì)胞接種

ibiTreat 表面培養(yǎng)皿：對于需在 ibiTreat 表面培養(yǎng)的細(xì)胞，直接將適量細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)皿中。例如，若細(xì)胞接種密度為每平方厘米 1×10?個(gè)細(xì)胞，對于生長面積 3.5cm2 的 µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿，可加入含有 3.5×10?個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液。輕輕晃動培養(yǎng)皿，使細(xì)胞均勻分布，避免產(chǎn)生氣泡，然后將培養(yǎng)皿放入 37℃、5% CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育。

未處理表面培養(yǎng)皿（若需包被）：若使用未處理的疏水表面培養(yǎng)皿且需進(jìn)行 ECM 蛋白包被，先將包被試劑（如多聚賴氨酸、纖連蛋白等）稀釋至合適濃度。取適量稀釋后的包被試劑加入培養(yǎng)皿，確保液體均勻覆蓋底部表面，室溫孵育 1-2 小時(shí)或按照試劑說明書要求的時(shí)間孵育。孵育結(jié)束后，用無菌 PBS 沖洗培養(yǎng)皿 2-3 次，去除未結(jié)合的包被試劑，然后進(jìn)行細(xì)胞接種，接種方法同 ibiTreat 表面培養(yǎng)皿。

bioinert 表面培養(yǎng)皿：對于培養(yǎng)懸浮細(xì)胞、球體或類器官的 bioinert 表面培養(yǎng)皿，直接將細(xì)胞懸液或含有細(xì)胞聚集體的溶液加入培養(yǎng)皿。同樣輕輕晃動使分布均勻后放入培養(yǎng)箱。由于細(xì)胞不會粘附在 bioinert 表面，在操作和觀察過程中需注意避免溶液過度晃動導(dǎo)致細(xì)胞聚集體位置改變。

細(xì)胞培養(yǎng)與觀察

日常培養(yǎng)：將接種細(xì)胞后的培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)箱，定期觀察細(xì)胞生長狀態(tài) 。根據(jù)細(xì)胞生長速度，每隔 1-2 天更換一次培養(yǎng)基，去除細(xì)胞代謝產(chǎn)物，補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì) 。觀察細(xì)胞時(shí)，可在倒置顯微鏡下直接觀察培養(yǎng)皿中的細(xì)胞，注意細(xì)胞形態(tài)、密度變化等。

顯微鏡成像：

熒光顯微鏡成像：若進(jìn)行熒光染色實(shí)驗(yàn)，當(dāng)細(xì)胞生長至合適階段，按照免疫熒光染色流程進(jìn)行操作。包括固定細(xì)胞（如使用 4% 多聚甲醛固定 15-20 分鐘）、通透處理（0.1% Triton X-100 處理 10 分鐘）、封閉（5% BSA 封閉 30 分鐘）、一抗和二抗孵育等步驟。染色完成后，用 PBS 清洗干凈，直接在熒光顯微鏡下觀察。由于 ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿底部的低自發(fā)熒光特性，可獲得清晰的熒光圖像。

其他顯微鏡成像：如需進(jìn)行 TIRF、DIC 等特殊顯微鏡成像，根據(jù)相應(yīng)顯微鏡的要求，將培養(yǎng)皿放置在配套的載物臺上。對于需使用特殊蓋子（如 DIC 蓋子）的實(shí)驗(yàn)，在成像前更換為相應(yīng)蓋子。調(diào)整顯微鏡參數(shù)，獲取高質(zhì)量的細(xì)胞圖像。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處理

廢棄物處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、一次性耗材等廢棄物，按照生物安全廢棄物處理規(guī)范進(jìn)行處理。對于可能含原體或危險(xiǎn)生物材料的廢棄物，需先進(jìn)行高壓滅菌或化學(xué)消毒處理，然后丟棄。

培養(yǎng)皿處理：若培養(yǎng)皿為一次性使用產(chǎn)品，直接丟棄至相應(yīng)廢棄物容器。若培養(yǎng)皿可重復(fù)使用（但需確認(rèn)產(chǎn)品說明是否支持），先將培養(yǎng)皿中的液體倒出，用清水沖洗干凈，然后浸泡在合適的清潔劑溶液中，超聲清洗去除殘留細(xì)胞和雜質(zhì) 。清洗后用蒸餾水沖洗多次，烘干備用。但需注意，重復(fù)使用可能會影響培養(yǎng)皿的性能，尤其是底部的光學(xué)性能和表面特性，對于對實(shí)驗(yàn)精度要求的實(shí)驗(yàn)，建議使用新的培養(yǎng)皿。

注意事項(xiàng)

培養(yǎng)皿儲存：未使用的培養(yǎng)皿應(yīng)儲存在干燥、清潔的環(huán)境中，避免陽光直射和高溫。對于已開封但未使用完的培養(yǎng)皿，需密封保存，防止灰塵和微生物污染。

操作過程無菌要求：在整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作過程中，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范。在超凈工作臺中進(jìn)行操作，使用前用 75% 酒精擦拭臺面和雙手，對使用的耗材、試劑等進(jìn)行表面消毒。避免交叉污染，不同細(xì)胞系或?qū)嶒?yàn)的操作應(yīng)分開進(jìn)行，使用不同的移液器和耗材。

蓋子鎖扣使用：當(dāng)需要減少液體蒸發(fā)時(shí)（如在非加濕的顯微鏡載物臺上進(jìn)行長時(shí)間成像實(shí)驗(yàn)），使用蓋子的鎖扣功能。但在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)正常培養(yǎng)時(shí)，無需一直使用鎖扣，以免影響氣體交換。

避免底部刮擦：在操作培養(yǎng)皿過程中，注意避免尖銳物品刮擦底部，尤其是用于高分辨率成像的聚合物蓋玻片底部或玻璃底部，刮擦可能會導(dǎo)致底部光學(xué)性能下降，影響成像質(zhì)量。拿取培養(yǎng)皿時(shí)，應(yīng)手持培養(yǎng)皿側(cè)壁，避免接觸底部。

特殊表面使用注意：對于 bioinert 表面的培養(yǎng)皿，由于其阻止細(xì)胞粘附的特性，在加入細(xì)胞懸液后，盡量減少培養(yǎng)皿的移動和晃動，以免細(xì)胞聚集體分散。同時(shí)，該表面不能進(jìn)行額外的蛋白包被等處理，需嚴(yán)格按照其適用范圍使用。